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    中藥提取技術文庫
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    HPLC檢測金銀花提取物中綠原酸含量的方法

    作者:綠原酸 來源:金銀花提取物 日期:2015/7/7 16:44:38 瀏覽量:63 評論:0 標簽:金銀花提取物

    金銀花FlosLonicerae又名忍冬、雙花,為臨床常用中藥,具有清熱解毒、涼散風熱之功效,主治癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發熱等。在中成藥中,金銀花或以細粉直接入藥,或以提取物的形式入藥,但大部分制劑以后者的形式入藥。

    金銀花提取物

      目的建立金銀花提取物中綠原酸含量的HPLC測定方法。方法國產C18柱(4.6mm×250mm,7μm);流動相為乙腈:0.4%磷酸(12∶88);檢測波長為327nm;流速1ml·min-1;進樣量10μl;柱溫25℃。結果綠原酸在0.0716~0.6444μg范圍內線性關系良好,r=0.9996;平均回收率99.99%,RSD=1.61%(n=6)。結論該方法簡便、快速、準確,可用于金銀花提取物的含量測定及質量控制。

      金銀花入藥有兩種形式,一是以全草直接投料,煎煮入藥,即以煎煮液(即藥材的提取液)作為半成品(中間體);另一種是先提取有效部位,而后以提取物投料,即以提取物作為中間體(原料)為了有效控制金銀花提取物(中間體)的內在質量,本實驗參考了有關文獻[2,3]及2005版《中國藥典》[4]方法,采用高效液相色譜法測定金銀花提取物中綠原酸含量。

      1儀器與試藥

      Agilent1100series高效液相色譜儀(G1322A排氣閥,G1311A泵,G1316A柱溫箱,G1314A紫外檢測器),chemistation色譜工作站,KromasilC18色譜柱,超聲提取器,綠原酸對照品(中國藥品生物制品鑒定所,批號110753-200212),金銀花提取物(本實驗室自制),乙腈,磷酸均為分析純;水為雙蒸水。

      2方法與結果[5]

      2.1分析方法的建立——分離及檢測條件的選擇

      2.1.1色譜條件色譜柱為國產KromasilC18柱(250mm×4.6mm,7μm);柱溫25℃;流動相為乙腈-0.4%磷酸(12∶88);流速為1ml·min-1;檢測波長327nm。

      2.1.2pH值對峰形的影響綠原酸屬于有機酸類物質,在HPLC測定時易發生前沿或拖尾峰,流動相加入酸可以改善這種現象。本實驗比較了水、乙酸、磷酸對峰形的影響,當選用0.4%磷酸時,可得到較好的色譜峰形。

      2.1.3色譜系統適應性實驗在選定條件下,綠原酸和樣品中其他組分可基線分離,綠原酸與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5,理論塔板數(N)為5000以上。

      a-對照品b-供試品

      2.2對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成每毫升含35.8μg的溶液,即得。2.3供試品溶液的制備精密稱取本提取物10mg,置100ml容量瓶中,雙蒸水溶解,超聲2min后,再用雙蒸水定容至刻度,搖勻,過0.45μg微孔濾膜,取續濾液即得。

      2.4線性范圍的考察及其標準曲線的繪制精密吸取對照品溶液2,4,6,10,14,18μl,分別注入液相色譜儀。按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值(A)對進樣量進行回歸,得回歸曲線方程:Y=2468.4X-16.205,r=0.9996。結果表明,綠原酸在0.0716~0.6444μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

      2.5精密度實驗精密吸取對照品溶液10μl,按上述色譜條件重復進樣6次,記錄各組綠原酸峰面積值,結果平均峰面積為:840.5,RSD為0.69%(n=6)。

      2.6穩定性實驗取同一供試品溶液,分別于0,2,4,6,8h進樣10μl,測得綠原酸的平均峰面積值為:680.24,RSD為:0.38%(n=5),表明供試品溶液在8h內穩定。

      2.7重復性實驗取同一批號(070204)樣品6份,按含量測定方法測定,結果綠原酸平均含量為28.01%,RSD為1.07%(n=6)。

      2.8加樣回收率實驗精密稱取已知含量的金銀花提取物6份,分別精密添加綠原酸對照品適量,按供試品溶液的方法制備,測定,計算回收率。

      2.9樣品測定取3批樣品,按照上述方法制備供試品溶液,進樣10μl,依照已確定的色譜條件測定,按峰面積值用外標法計算樣品中綠原酸的含量。

      3討論

      金銀花提取物以有機酸為有效成分,本實驗以綠原酸含量作為金銀花提取物的質量控制指標,同時測定了3批金銀花提取物中綠原酸的含量,通過計算,其含量均在20%以上。本文所建立的方法簡便、快捷,重復性及穩定性均較好,可在實際生產中用于該提取物的質量控制。本文所做的工作為開發金銀花的相關產品提供了質量監控方法。

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